双位点一步法用是识别抗原不同位点的两个单克隆抗体作双抗体夹心法。检测时标本和酶标抗体同时加入。在双抗体夹心法测抗原时标本和酶标同时加入，当标本中待测抗原浓度过高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合而不再形成夹心复合物，所测结果偏低或出现假阴性，即为钩状效应。