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单向琼脂扩散试验有两种：①试管法由Oudin于1946年报道。将血清或纯化抗体混入约50℃的0.7%琼脂糖溶液中；②平板法由Mancini于1965年提出，将抗体或抗血清混入0.9%琼脂糖内（约50℃）。则琼脂糖煮化后温度降至约50℃时加入抗血清。